柱色谱分离叶绿素

       植物绿叶中含有多种天然色素，最常见的是胡萝卜素（橙色），叶绿素（绿色）和叶黄素（黄色）。

       叶绿素存在两种相似的形式即叶绿素a（C₅₅H₇₂O₅N₄Mg）和叶绿素b（C₅₅H₇₀O₆N₄Mg）两者差别只是a中一个甲基被b中的甲酰基取代。它们都是吡咯衍生物和金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚，石油醚等一些非极性的溶剂。

一、实验目的

  1、学习从植物中提取色素的方法。

  2、叶绿素的去镁离子操作。

二、实验原理

       植物绿叶中含有多种天然色素，最常见的是胡萝卜素（橙色），叶绿素（绿色）和叶黄素（黄色）。

       叶绿素存在两种相似的形式即叶绿素a（C₅₅H₇₂O₅N₄Mg）和叶绿素b（C₅₅H₇₀O₆N₄Mg）两者差别只是a中一个甲基被b中的甲酰基取代。它们都是吡咯衍生物和金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚，石油醚等一些非极性的溶剂。

三、主要仪器和试剂

       仪器：研钵、树脂管、锥形瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、分析天平、铁架台、洗耳球、分液漏斗、移液管。 

       试剂：硅胶、乙酸乙酯、石油醚、丙酮、正丁烷、正丁醇、乙醇。

四、实验步骤

  1、菠菜叶绿素的提取

        将菠菜洗净，甩去叶面上的水珠。称取10克用剪刀剪碎，置于研钵中捣烂。

        加30ml 2：1 石油醚-乙醇溶液，分几次浸提、抽滤。滤液转入分液漏斗，每次用15ml水洗涤两次。弃去水-醇层，将石油醚层用无水硫酸钠干燥。

  2、柱色谱分离

      （1）湿法装柱

       将树脂管竖直固定在铁架台上，关闭活塞，加入石油醚至柱容积1/4处，将需要量的硅胶置于烧杯中，加入石油醚浸润，溶胀并调成浆糊状。打开柱下活塞，调节流速为每秒钟一滴，将调好的硅胶在搅拌下自柱顶缓缓注入柱中，同时用硬橡胶棒轻轻敲击柱身，使硅胶在石油醚中均匀沉降，形成均匀紧密的吸附剂柱。吸附剂加至2/3柱身后，待柱面液体水平，关闭活塞。

       （2）湿法加样

       将待分离的提取液用玻璃棒引流沿着内壁缓缓加入，切记不要冲动吸附剂。溶液加完后，小心开启柱下活塞，待提取液渗入硅胶层中分层，关闭活塞。用少许石油醚冲洗柱内壁，再放出液体至液面将至硅胶层。

       （3）淋洗和接收

   ①首先，用50ml 9：1 的石油醚-病痛溶液洗脱，当第一个橙黄色带即将流出来时，换接收瓶。——胡萝卜素。

   ②换50ml 7：3 石油醚-丙酮洗脱，当第二个棕黄色带流出时，换接收瓶。——类胡萝卜素。

   ③换30ml 3：1：1 的正丁醇-乙醇-水洗脱，接收叶绿素。

五、注意事项

  1、淋洗剂流出速度不宜过快。

  2、适当选择吸附剂和淋洗剂。

  3、柱身需安装垂直。

  4、避免断层和裂缝，以及沟流现象。