1.1 原理
工作时储液瓶中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经样品进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸得分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱的形式打印出来。
1.2主要技术参数
1.2.1 四元梯度泵可设置的流速范围：0.001-10mL/min；
1.2.2 进样范围：0.1～100μL，增量为0.1μL；
1.2.3 检测器 噪声：在230nm处，<±0.25×10-5AU；漂移：在230nm处，<1×10-4AU/小时；波长范围：190-600nm；
1.2.4 柱温箱控温范围：室温下10℃ - 80℃，带降温功能；
1.3使用环境
室内照明要光线适中，避免阳光直射。应注意仪器室的通风，以排除室内有害气体、保持空气清新。
一般要求室温在20～30℃之间，日温度变化2～3℃，不要波动太大，否则，在开机分析时会影响色谱分离；室内相对湿度应控制在60%以下。必须要保证稳定的输人电压，为此，建议色谱室应设有和仪器负荷相当的稳压电源。室内墙上应安装有接地电阻符合要求的地线，还要注意保持室内清洁。
2. 适用范围
此文件适用于成都普思生物科技股份有限公司分析测试中心Agilent1260 HPLC的操作和维护保养。
一.开机前准备
a、明确实验目的，检测样品的性质，选择相应的分析色谱柱；
b、配制分析的样品和流动相，选用色谱纯流动相或用0.22 μm的过滤膜过滤，样品也可10000rpm离心10min。
c、检验仪器和计算机的电源线，数据线是否连接完好。
二.开机
a、打开计算机的电源，待计算机运行完全后；
b、依次打开脱气机、泵、柱温箱、检测器的电源开关；
c、待仪器自检完成后，双击桌面上的“Instrument 1 online 在线”图标，打开工作站。
三.样品分析
1.溶剂替换与系统平衡
a、配制好的流动相到入溶剂瓶中，并在化学工作站上修改倒入的流动相体积；
b、逆时针转动A/B/C/D泵的排液阀，打开排液阀；设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗5min后再按[pump]键停泵，将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀，如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽；
c、在柱温箱中连接上分析柱，根据分析柱所承受的压力设置平衡流速，替换分析柱的保存液。
2.编辑方法
a、在Instrument online主界面上选择Method→Edit Entire Method；
b、根据提示编辑完所有的参数，设定合适的泵流量和检测器波长；
c、保存所编辑的方法。
3.样品采集与分析
a、在Method & Runcontrol界面上选择上选择File→Load→Method，选择分析方法文件；
b、单针进样：在Method & Runcontrol界面上选择Runcontrol → Sample Infomation，依提示输入保存路径、文件名称、样品名称、操作者等信息，进样时同时按工作站面板上的Start键，即开始样品分析与数据采集；
c、多针进样：在Method & Runcontrol界面上，选择Sequence→Sequence table，输入进样位置、样品名称、分析方法、进样次数、进样量及样品信息等；将准备好的样品置于自动进样器上，选择Runcontrol →Run Sequence，即开始多个样品分析与数据采集。
4.报告输出与编辑
a、在Instrument online主界面上选择View → Data Analysis，进入 Data Analysis界面；
b、选择所要处理的数据文件；
c、选择所要选用的报告格式，输出报告。
四.关机
a、分析结束后，点击检测器图标，选择control→off，关闭分析紫外灯；
b、选择合适的流动相，冲洗泵，进样阀，分析柱和检测器；
c、依次关闭化学工作站，仪器各个模块电源和计算机电源。
五.注意事项
a、多相流动相分析时，含盐流动相在上（A、C相），有机相在下（B、D相）；
b、水相置于棕色溶剂瓶中，每次使用都要换成新鲜的溶液，防止长菌。
c、仪器运行时，泵头必须用10%异丙醇水溶液虹吸冲洗，不能干涸。
